利巴韋林化學(xué)名稱為：1-b-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺。又稱三氮唑核苷或病毒唑，是一種能抑制核酸合成的廣譜抗病毒yao。
傳統(tǒng)的HPLC法均采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱檢測利巴韋林，但是該柱填料存在一些缺點(diǎn)。一方面硅膠填料鍵合的C18鏈會脫落，在較高的pH條件下，硅膠基質(zhì)易降解；另一方面，由于利巴韋林分子結(jié)構(gòu)上含有機(jī)氮基團(tuán)，在硅膠基材的色譜柱中，會因色譜柱填料中殘存的硅羥基與有機(jī)氮結(jié)構(gòu)產(chǎn)生氫鍵吸附，導(dǎo)致樣品部分地粘附在色譜柱的填料上，從而造成峰形拖尾和柱壓升高。
月旭材料科技（上海）有限公司推出的專用于利巴韋林分析的色譜柱，系采用高品質(zhì)離子排阻色譜填料——磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填裝制成的氫型強(qiáng)陽離子交換色譜柱，符合美國25版藥典收載的利巴韋林含量測定HPLC測定法，以及中國2005版和2010版藥典中對色譜柱的要求。具有耐酸、耐高溫的特點(diǎn)，并可通過提高柱溫提高分析效率。

使用步驟：
1．用兩通取代色譜柱將儀器連接，用過濾好的超純水沖洗儀器50ml；
2．再用分析流動相沖洗儀器50ml，將流速降到0ml/min；
3．將Xtimate® Sugar-H色譜柱連接在 HPLC系統(tǒng)上；
4．設(shè)置流速在 0.2-0.3ml/min直到柱溫達(dá)到設(shè)定值；
5．在柱溫達(dá)到設(shè)定值時，流速增至分析流速，流速變化以0.1ml/min為增量,待反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速。zui大流速不應(yīng)使壓力超過1500psi。

流動相要求：
常用5~10 (mmol/l)的硫酸作為流動相。推薦的流動相用去離子的無菌水配制，水應(yīng)去離子化 ,大于2兆歐的電阻率 ,水中應(yīng)不含多價離子 ,尤其是過渡金屬元素和重金屬離子。使用前需用真空泵通過0.45um或更小孔徑的濾膜除去細(xì)菌和其它顆粒，溶劑過濾推薦使用溶劑過濾器。
雖然流動相已經(jīng)在真空過濾時脫氣,但還是應(yīng)該通過以下程序來*脫氣. 如果系統(tǒng)連續(xù)使用不止一天 ,請將流動相置于錐形瓶中 ,放在攪拌器 /電爐上 ,用鋁箔封上瓶口以減小蒸發(fā),用前將流動相燒至沸點(diǎn)幾分鐘,使用時保持溫度 70‐90℃.這個操作能夠保證氣體 (尤其是CO2)不再重新溶解在流動相中,同時也會防止微生物的滋生。
要保持裝流動相的容器干凈,有蓋,且新鮮 ,流動相需每 24小時重新配制。

注意事項(xiàng):
通常推薦壓力不超過 1500psi；
zui大流速推薦不超過 0.6ml/min(70℃) ；
流動相中有機(jī)相的zui大含量為5%(V/V),樣品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和異丙醇不會影響柱子的性能；
柱子的溫度不要超過 95℃.通常高溫會帶來高的分辨率,但在 90‐95℃之間幾乎沒有變化，70℃以下對于許多糖,就異構(gòu)體的分離來說不能提供足夠的分辨率,對于乙醇的定量,柱溫應(yīng)在75℃；
柱溫的快速變化不會對柱子帶來什么反作用,如果柱子在 60℃以下,那么zui高的流速為0.2ml/min,由于水在低溫時的高的粘度因此高的流速會帶來很高的反壓；
定期反向沖洗色譜柱(在每 5L流動相之后),這將會有效地延長色譜柱的壽命；
流速的變化不能超過0.5ml/min,流速變化應(yīng)該緩慢進(jìn)行,建議改變流速時以0.1ml/min為增量,直到反壓穩(wěn)定后再繼續(xù)增加流速.任何的流速變化均要在不超過 0.5ml/min下進(jìn)行；在溶劑輸出系統(tǒng)中壓力限制的設(shè)定應(yīng)比普通的工作壓力高出幾百psi,從而避免任何儀器未被注意的額外壓力升高。

保存條件:(72小時以上不用)
關(guān)掉柱溫箱,待柱子冷卻至室溫，停泵。
當(dāng)柱子冷卻后,從系統(tǒng)中移出,換上塑料堵頭,防止保存溶劑揮干,通常的流動相都可作為保存柱子的適宜溶劑.在冰箱中5℃保存(不要冷凍),以防止微生物的滋生；
柱子拆掉后要用兩通連接在系統(tǒng)上, 先用水沖洗整個液相色譜系統(tǒng),然后用甲醇,zui后儀器系統(tǒng)保存在甲醇中。

在關(guān)機(jī)后的重新啟動
當(dāng)開啟帶有一個柱溫很低的柱子的系統(tǒng)時,打開柱溫箱,流速開始不要超過 0.2ml/min.待系統(tǒng)在此條件下穩(wěn)定至少二十分鐘達(dá)到工作溫度后再按通常的工作條件操作。

整夜的停機(jī)(放置少于 72小時)
柱子留在系統(tǒng)中流速降到 0.2ml/min.循環(huán)溶劑,將流出的管路插入流動相瓶中,如果不想開著柱溫箱,那就關(guān)掉柱溫箱讓其冷卻。

在整夜停機(jī)后的開啟
打開柱溫箱,流動相的流速不要超過 0.1‐0.2ml/min,保持此流速至少二十分鐘直到達(dá)到柱子工作所需溫度,然后再按照通常分析條件來設(shè)置。

故障檢查
Sugar‐H是以樹脂的膨脹形態(tài)緊密裝填的,如果樣品進(jìn)行了很好的前處理,那么大部分產(chǎn)生的問題都和樹脂填料有關(guān),由于單向閥的損壞或是突然地反壓增加, 脆弱的樹脂填料可能被泵的波動沖到柱子的后篩板處.反壓的增加是否會發(fā)生,要經(jīng)常檢查在線過濾器以及保護(hù)柱中是否截留了微粒.如果不是此問題,那么很可能是樹脂部分地堵在了出口端的篩板處,檢查這種情況是否發(fā)生需要關(guān)掉泵,將柱子的流路方向反過來,然后泵流速開到 0.1ml/min,20分鐘達(dá)到工作溫度后再設(shè)至工作時的流速。

柱子的再生步驟:
Sugar‐H柱子的再生方法根據(jù)相關(guān)的樣品純度有不同的變化,越是天然物,(尤其是含有那些重金屬和過渡金屬元素或是有機(jī)酸的樣品)越需要經(jīng)常地對柱子進(jìn)行再生,因?yàn)樗鼈儠c柱子發(fā)生置換。

如果利巴韋林的峰有拖尾,那么柱子需要做以下處理:
配制 500ml的再生溶液(pH2.5的稀硫酸), 把柱子流路方向反過來,在 90℃下以0.5ml/min的流速沖洗一整夜.再生之后回到正常方向使用。當(dāng)柱子反沖時很重要的一點(diǎn)是需要保持溶劑的溫度從而確保正確的沖洗,用冷的溶劑將會延緩沖洗的過程。