色譜雙峰指的是同一種物質(zhì)，在色譜圖中表現(xiàn)出雙峰，讓我們誤以為是兩種物質(zhì)。那為什么會(huì)出現(xiàn)這種情況，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中又該怎么避免，今天小編就和大家一起來(lái)聊一聊。

在HPLC分析中，在色譜柱正常、樣品濃度適宜、分析方法合適、色譜峰在出峰時(shí)間較短的情況下，峰形應(yīng)是一個(gè)高斯峰型，對(duì)稱(chēng)而尖銳的。然而在實(shí)際操作中，如果對(duì)樣品性質(zhì)不了解，前處理不恰當(dāng)或者分析方法不合理時(shí)，就會(huì)出現(xiàn)峰形不正常的情況，其中雙峰現(xiàn)象是液相色譜常見(jiàn)的問(wèn)題之一。出現(xiàn)色譜雙峰的原因一般有以下幾種：

如果在分析樣品時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都是雙峰，尤其是分析單一純物質(zhì)時(shí)，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問(wèn)題了，一般是柱頭受損引起的。如果進(jìn)樣量少，原來(lái)色譜峰正常，峰形多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾時(shí)，應(yīng)考慮是柱頭端被堵塞，可以將色譜柱反接（月旭的色譜柱可以反沖），用流動(dòng)相或酸或其他有機(jī)溶劑沖洗，將堵在柱頭端的物質(zhì)沖掉后，再正接測(cè)試，通常會(huì)有改善。當(dāng)然也可以不反沖，正沖有時(shí)也有效果。

如果雙峰強(qiáng)弱相差不大，柱頭端填料變臟或柱流失的可能性更大，這時(shí)可以把柱頭擰開(kāi)，將篩板取下超聲，柱頭端刮去被污染的填料，填上新填料后再擰緊，不過(guò)這個(gè)最好是由專(zhuān)業(yè)人員操作且不能經(jīng)常做，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效降低而報(bào)廢。如果上述操作仍不能解決問(wèn)題，則可能是柱塌陷造成的，需要更換色譜柱。

目前HPLC分析多為反相色譜，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈、水，加入各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解，最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解。在實(shí)際分析中，有時(shí)候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一定的緩沖液，緩沖液的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時(shí)需要更換緩沖液，調(diào)整溶劑pH值，或者用流動(dòng)相配置樣品。

此外，樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用，避免因樣品溶解液的有機(jī)相比例、pH值發(fā)生變化而導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)。

當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑溶解樣品，如甲醇、乙腈、乙醇等，而分析體系以水為主時(shí)，如果樣品進(jìn)樣量大，比如進(jìn)20μL，此時(shí)目標(biāo)物會(huì)出現(xiàn)雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣)，且拖尾，保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言)，將進(jìn)樣量減少一半以上，峰型將變?yōu)檎！＿@是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大，而流動(dòng)相來(lái)不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的，這種情況下需要減少進(jìn)樣量或者用流動(dòng)相溶解樣品。

另一個(gè)原因是，進(jìn)樣量不一定大，但絕對(duì)量很大，色譜圖上的雙峰緊靠在一起，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快，也可能是色譜柱問(wèn)題)。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了，這是由于進(jìn)樣量過(guò)大，色譜柱過(guò)載造成的。

體系pH值對(duì)色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個(gè)環(huán)節(jié)上，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過(guò)程中其影響更為明顯。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續(xù)變化影響會(huì)經(jīng)常遇到這種雙峰的情況。另外，在樣品分析時(shí)，流動(dòng)相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn)，否則也容易引起產(chǎn)生雙峰。在用離子對(duì)試劑分析時(shí)，液相條件沒(méi)選擇好也會(huì)引起雙峰。

有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，存在異構(gòu)體。有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰，但在LC-MS下，其質(zhì)譜的總離子流圖（TIC）上較明顯，如啶蟲(chóng)脒。

參比波長(zhǎng)設(shè)置錯(cuò)誤，例如設(shè)置分析波長(zhǎng)254nm，參比波長(zhǎng)400nm，這個(gè)對(duì)于大多數(shù)化合物可能沒(méi)影響。但是如果被測(cè)化合物，在400nm處也有強(qiáng)的紫外吸收，比254nm更高。這樣其出峰時(shí)，由于背景的抵扣作用，本來(lái)一個(gè)峰會(huì)變成對(duì)稱(chēng)的二個(gè)峰，而且如果將二峰之間的峰谷反轉(zhuǎn)180度，恰好是一個(gè)完整的峰。這時(shí)要將參比波長(zhǎng)設(shè)置更大，或者取消。

當(dāng)然，如果儀器存在較大死體積，也可能會(huì)導(dǎo)致雙峰出現(xiàn)。

在對(duì)樣品不夠了解，分析方法不當(dāng)，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理情況下，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問(wèn)題，也很難對(duì)色譜峰作出合理的解釋?zhuān)绕鋵?duì)于新手更是如此，所以，了解每種異常出現(xiàn)的原因，并根據(jù)原因采取合理的改進(jìn)措施，是避免異常峰出現(xiàn)的*的辦法。