此前，為大家簡述了氣相色譜中的“溶劑效應(yīng)。而高效液相色譜分析作為現(xiàn)代藥物分析的重要手段，在日常實(shí)驗中，分析工作者通常將注意力集中在流動相和色譜柱以及儀器方法的選擇上。故而當(dāng)出現(xiàn)異常峰形時，分析工作者往往會忽略溶解樣品所用的溶劑不恰當(dāng)也是成因之一。所以一招“借刀殺人”，就讓各種色譜耗材為不合適的溶劑背了鍋。

溶劑效應(yīng)的概念

通常情況下我們認(rèn)為的“溶劑效應(yīng)”是樣品溶劑強(qiáng)度大于流動相強(qiáng)度時造成的色譜峰變形的現(xiàn)象。但我們會發(fā)現(xiàn)，有時我們的樣品溶劑的強(qiáng)度并未大于流動相，但由于加入了某些稀釋劑，使得峰形變形情況依舊出現(xiàn)。因此廣義上對“溶劑效應(yīng)”的概念應(yīng)擴(kuò)展為由于樣品中某些組分在稀釋劑與流動相中的存在狀態(tài)有較大差異，導(dǎo)致色譜行為表現(xiàn)異常的情況。

溶劑效應(yīng)的成因

01 溶劑強(qiáng)度

這便是普遍意義上的“溶劑效應(yīng)”成因，如當(dāng)流動相組成為低比例的乙腈水溶液，而樣品溶劑為純乙腈時，會由于溶劑的強(qiáng)度大于流動相而產(chǎn)生峰分叉或峰拖尾。

02 進(jìn)樣體積

當(dāng)進(jìn)樣體積較小時，擴(kuò)散至流動相中的溶質(zhì)占大多數(shù)，且擴(kuò)散在很短時間內(nèi)完成，因此峰形與用流動相直接溶解樣品無大差異。隨著進(jìn)樣的體積增大，留在溶劑本身里的溶質(zhì)的量逐漸增大，當(dāng)進(jìn)樣體積增大到一定數(shù)量，留在溶劑里的溶質(zhì)的量變得不可忽略，在色譜圖上就表現(xiàn)為色譜峰的分叉、拖尾等。

03 溶劑兼容性

有時，當(dāng)我們使用流動相或流動相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品，這時很多小伙伴會選擇使用氯仿、甲苯等能溶的溶劑，甚至DMSO這樣的“萬能溶劑”來溶解樣品。這樣進(jìn)樣的結(jié)果是溶劑與流動相不兼容，溶質(zhì)難以在流動相中擴(kuò)散。又如，在做參比制劑的溶出曲線中，溶媒中經(jīng)常加入表面活性劑。而帶有表面活性劑的溶劑進(jìn)樣后，由于溶質(zhì)在含有表面活性劑的溶劑中的分配系數(shù)與在流動相中的分配系數(shù)存在較大差異，就會導(dǎo)致峰形的問題，甚至保留時間的漂移。

04 電離狀態(tài)

電離狀態(tài)的差異主要由溶劑和流動相各自的pH差異引起。我們都知道，在反相體系中，目標(biāo)化合物的存在狀態(tài)不同，保留行為會有明顯的差異，而存在狀態(tài)就取決于目標(biāo)化合物在不同pH體系內(nèi)的電離狀態(tài)。若樣品在溶劑和流動相中電離狀態(tài)差異較大，樣品溶液在接觸流動相的過程中，來不及緩沖至流動相中的電離狀態(tài)，是個時間如果較長，就容易表現(xiàn)為保留時間發(fā)生錯位或峰形變形，如下圖的案例。

（流動相為pH 3.0緩沖鹽。綠色譜圖為對照品，另外三個譜圖樣品的溶劑從下至上分別為0.1%磷酸、純化水、pH 3.0流動相）

溶劑效應(yīng)的解決

01 溶劑強(qiáng)度

對于這一Z普遍的溶劑效應(yīng)，解決辦法即調(diào)整稀釋劑或流動相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動相都是可以的。一般情況下，為避免溶劑強(qiáng)度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑中有機(jī)相比例和流動相相當(dāng)，必要時可略高于流動相，但應(yīng)當(dāng)據(jù)其評估其溶劑效應(yīng)風(fēng)險。

02 進(jìn)樣體積

常規(guī)情況下，為了保證峰形，我們的進(jìn)樣體積都控制在5-20μL，盡量不要超過25μL。如果不能做到減少至合適的進(jìn)樣體積，為了得到較好的峰形，應(yīng)盡量選擇與流動相比例相同或接近的溶劑。

03 溶劑兼容性

使得溶劑與流動相能較好地兼容，目前辦法有兩個：

一、若流動相或流動相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲備液，然后用流動相稀釋至所需濃度；

二、在流動相中加入同樣的助溶劑或表面活性劑，或提高有機(jī)相的比例。

04 電離狀態(tài)

電離狀態(tài)的差異許多情況下會表現(xiàn)為保留時間的漂移或不穩(wěn)定。可以通過將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動相一致，或增大流動相的緩沖能力來改善。

以上便是小編為大家總結(jié)的高效液相色譜“溶劑效應(yīng)”的原理及解決辦法。高效液相色譜進(jìn)樣前，必須選擇一種合適的溶劑體系。若溶劑選擇不當(dāng)會使得峰形發(fā)生不同程度的異常，進(jìn)而影響分析結(jié)果。