1、由強(qiáng)到弱：一般先用90%的乙腈或甲醇－水或緩沖溶液進(jìn)行試驗(yàn)，可很快得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

2、三倍規(guī)則：每減少10%的有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）的量，保留因子增加約3倍，此為三倍規(guī)則。調(diào)整時(shí)注意觀(guān)察各個(gè)峰的分離情況。

3、粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí)，應(yīng)將有機(jī)溶劑（乙腈或甲醇）10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。

凝膠制備液相色譜儀的進(jìn)樣方式

1．隔膜進(jìn)樣。用微量注射器將樣品注進(jìn)專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的與色譜柱相連的進(jìn)樣頭內(nèi)，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎即是零，可以獲得的柱效，且價(jià)格便宜，操縱方便。但不能在高壓下使用；此外隔膜輕易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應(yīng)，使進(jìn)樣重復(fù)性只能達(dá)到1~2%；加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到，常規(guī)分析使用受到限制。  

2．停流進(jìn)樣。可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì)出現(xiàn)“鬼峰”；另一缺點(diǎn)是保存時(shí)間不準(zhǔn)。在以峰的始末信號(hào)控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。  

3．閥進(jìn)樣。一般HPLC分析常用六通進(jìn)樣閥，其關(guān)鍵部件由圓形密封墊和固定底座組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進(jìn)樣，但耐高壓，進(jìn)樣量正確，重復(fù)性好，操縱方便。  

4．自動(dòng)進(jìn)樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。  

早期使用隔膜和停流進(jìn)樣器，裝在凝膠制備液相色譜儀進(jìn)口處。現(xiàn)在大都使用六通進(jìn)樣閥或自動(dòng)進(jìn)樣器。進(jìn)樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復(fù)性好，保證中心進(jìn)樣，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。